甲流疫苗中的鋁佐劑粒度控制

2月22日，北京市疾控中心發布消息，當前北京市流行的流感病毒中，甲型流感病毒感染占絕對優勢，其中甲型H1N1亞型占64%，甲型H3N2占35%，乙型流感占1%。據某搜索指數，近七日以來，“甲流"的搜索及報道量呈顯著上升趨勢，僅2月24日，就有69417的搜索量。 ^[1,2]甲流橫行，接種流感疫苗可預防甲型流感。

目前,甲流疫苗主要有三種類型：全病毒滅活疫苗［Influenza Vaccine（Whole Virion）,Inactivated；InfV-W］、裂解滅活疫苗［Influenza Vaccine（Split Virion），Inactivated；InfV-Sp］和亞單位滅活疫苗［Influenza Vaccine（Subunit），Inactivated；InfV-Su］等。根據疫苗生產是否加入佐劑，又分為有/無佐劑疫苗。流感疫苗研究中應用到的佐劑主要有鋁佐劑（氧化鋁、氫氧化鋁、磷酸鋁）、MF59、LTK63、新型佐劑等，甲流疫苗常用的佐劑為鋁佐劑。^[3,4] 

一、 鋁佐劑粒徑檢測

鋁佐劑是第一個被批準用于人體的疫苗佐劑，用于增加機體對于疫苗的反應，特別是增強抗體的產生，改善由于年齡、疾病或其他原因導致疫苗反應能力降低的問題。在免疫過程 中，通過將抗原吸附到佐劑上，使得抗原被攜載進入機體從而誘導產生免疫應答。采用鋁佐劑類型，往往會用氫氧化鋁或者磷酸鋁。氫氧化鋁是一種表面只有羥基基團的層狀晶體，以纖維粒子形式存在，這種粒子聚集后以松散的形式存在，大小約1-10μm，只有佐劑顆粒的外層可以和抗原結合。磷酸鋁佐劑是羥基磷酸鋁復合物，為無定形結構，初始顆粒的是直徑為50nm的盤狀結構，然后形成大約3μm左右的松散粒子。

影響鋁佐劑應答反應的因素包括抗原佐劑的吸附率、吸附強度、佐劑顆粒大小及均一性，其中佐劑顆粒大小可影響對抗原的提取、轉運及與抗原相互作用。^[5]  此外，還需關注過小的顆粒濃度，如果過小顆粒濃度過多，如低于100nm，幾十納米左右，那么注入體內后可以穿過人體內大部分細胞屏障，到達的人體部位更多更廣，由此造成的毒副作用會增加。在去年，輝瑞團隊撰寫的關于《鋁佐劑疫苗的懸液性質及表征》章節中，也提到了通過LumiSpoc關注小顆粒濃度。^[6]

疫苗在實際應用過程中，常用冷藏方式保護疫苗免于高溫破壞，但也有使疫苗暴露于過低溫度的風險。含鋁佐劑的疫苗在經冷凍后效價降低明顯。正常情況下，佐劑與抗原結合在一起。凍融后，佐劑與抗原之間的結合鍵會被破壞，導致佐劑與抗原脫離。分離的佐劑，會逐漸聚集，形成較大較重的顆粒，并慢慢沉淀于底部。失去佐劑的抗原，免疫原性大大降低、免疫效果大打折扣，疫苗也就失去了應有的預防作用。同時，游離佐劑形成的大顆粒物質，還會導致免疫副反應的發生幾率升高^[7]。因此，對于鋁佐劑大顆粒的監控，大顆粒的控制也是穩定工藝和避免不良反應的監控要點。

AccuSizer顆粒計數器系列

AccuSizer系列在檢測液體中顆粒數量的同時精確檢測顆粒的粒度及粒度分布，通過搭配不同傳感器、進樣器，適配不同的樣本的測試需求，能快速而準確地測量顆粒粒徑以及顆粒數量/濃度。

LumiSpoc 單粒子顆粒計數器

LumiSpoc采用單粒子光散射技術（SPLS），通過在光學流通池中進行流體動力聚焦，將單個粒子排列成一條直線。通過調整流動條件來調整樣品濃度，從而避免濃度峰值的影響。當單個納米或者微米顆粒經過特殊光束截面的激光束時，記錄其正向和側向散射的光強。根據米氏理論，將分類強度轉換為粒度分布密度。通過軟件分析顯示計數分布、顆粒濃度。在行業內已有使用Lumispoc用于顆粒濃度的監測成功案例。

二、鋁佐劑安全性控制

鋁佐劑中的雜質會影響鋁佐劑的安全性，鋁佐劑所用的生產材料一般為無機鹽，鋁佐劑中所含雜質可能由原材料引入，也可能在生產過程中產生，最終可被帶入至下游各階段產物中。因此應考慮設置相關工藝步驟去除雜質，并對關鍵生產參數、過程控制、反應容器等多方面進行充分驗證。

Entegris-ANOW 濾芯

Entegris-Anow是一家高分子微孔膜過濾企業，專業從事MCE、Nylon、PES、PVDF、PTFE等（膜孔徑為0.03μm~10μm）微孔膜的研發及生產，具有二十多年服務與醫藥客戶經驗，并為全球生物制藥、醫療器械、食品飲料、實驗室分析、微電子及工業等領域的客戶提供過濾、分離和凈化解決方案。

Entegris與Anow的結合，引入Entegris質量管理體系，每一支濾芯都經過嚴格檢查，此外，新建成的CTC驗證中心，為全球客戶提供專業的驗證服務。

參考文獻：

[1]   澎湃新聞

[2]   張偉偉,李亮,朱鳳才,修仕信.甲型H_1N_1流行性感冒疫苗研究進展及不良反應監測[J].

[3]   中國疫苗和免疫,2010,16(03):275-278.

[4]   馬環,汪運洋,王chen,王珣,周第,陳興,潘海龍.納米氫氧化鋁佐劑的制備及其相關性質分析

[5]   中國生物制品學雜志,2022,35(09):1107-1111.

[6]   Langford, A., Bruchsaler, M., & Gupta, M. (2022). Suspension properties and characterization of aluminum-adjuvanted vaccines. Practical Aspects of Vaccine Development.

[7]   陳婷婷, 陸偉根. 鋁佐劑特性及其研究進展[J]. 世界臨床藥物, 2015(2):7.